ksmaКубанский научный медицинский вестникKuban Scientific Medical Bulletin1608-62282541-9544Kuban State Medical University10.25207/1608-6228-2022-29-3-62-75ksma-2861Research ArticleОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ. МЕДИКО-БИОЛОГИЧЕСКИЕ НАУКИORIGINAL ARTICLES. MEDICAL AND BIOLOGICAL SCIENCESПолиморфизм RS652438 гена MMP12 и степень окислительного повреждения геномной ДНК при бронхиальной астме: экспериментальное нерандомизированное исследованиеPolymorphism rs652438 of gene mmp12 and oxidative DNA damage in bronchial asthma: An experimental non-randomised studyhttps://orcid.org/0000-0001-7080-7641ПавлюченкоИ. И.PavlyuchenkoI. I.

Павлюченко Иван Иванович — доктор медицинских наук, профессор; заведующий кафедрой биологии с курсом медицинской генетики

ул. им. Митрофана Седина, д. 4, г. Краснодар, 350063

Ivan I. Pavlyuchenko — Dr. Sci. (Med.), Prof., Head of the Chair of Biology with course of medical genetics 

Mitrofana Sedina str., 4, Krasnodar, 350063

https://orcid.org/0000-0002-4316-3868ГусарукЛ. Р.GusarukL. R.

Гусарук Любовь Рамазановна — кандидат биологических наук, доцент; доцент кафедры биологии с курсом медицинской генетики

тел.: +7 (903) 411-04-74

ул. им. Митрофана Седина, д. 4, г. Краснодар, 350063

Lyubov R. Gusaruk — Cand. Sci. (Biol.), Assoc. Prof., Chair of Biology with course of medical genetics

tel.: +7 (903) 411-04-74 

Mitrofana Sedina str., 4, Krasnodar, 350063

gusaruk@yandex.ruhttps://orcid.org/0000-0003-1689-8815ТекуцкаяЕ. Е.TekutskayaE. E.

Текуцкая Елена Евгеньевна — кандидат химических наук; доцент кафедры радиофизики и нанотехнологий

ул. Ставропольская, д. 149, г. Краснодар, 350040

Elena E. Tekutskaya — Cand. Sci. (Chem.), Assoc. Prof., Chair of Radiophysics and Nanotechnology 

Stavropolskaya str., 149, Krasnodar, 350040

https://orcid.org/0000-0001-9328-8741ПрозоровскаяЮ. И.ProzorovskayaYu. I.

Прозоровская Юлия Игоревна — аспирант кафедры биологии с курсом медицинской генетики

ул. им. Митрофана Седина, д. 4, г. Краснодар, 350063

Yuliya I. Prozorovskaya — Postgraduate Student, Chair of Biology with course of medical genetics 

Mitrofana Sedina str., 4, Krasnodar, 350063

https://orcid.org/0000-0002-8991-7194ПочешховаЭ. А.PocheshkhovaE. A.

Почешхова Эльвира Аслановна — доктор медицинских наук, профессор кафедры биологии с курсом медицинской генетики

ул. им. Митрофана Седина, д. 4, г. Краснодар, 350063

Elvira A. Pocheshkhova — Dr. Sci. (Med.), Prof., Chair of Biology with course of medical genetics 

Mitrofana Sedina str., 4, Krasnodar, 350063

Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Кубанский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской ФедерацииРоссияKuban State Medical UniversityRussian FederationФедеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Кубанский государственный университет»РоссияKuban State UniversityRussian Federation2022280620222936275Copyright © Павлюченко И.И., Гусарук Л.Р., Текуцкая Е.Е., Прозоровская Ю.И., Почешхова Э.А., 20222022Павлюченко И.И., Гусарук Л.Р., Текуцкая Е.Е., Прозоровская Ю.И., Почешхова Э.А.Pavlyuchenko I.I., Gusaruk L.R., Tekutskaya E.E., Prozorovskaya Y.I., Pocheshkhova E.A.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://ksma.elpub.ru/jour/article/view/2861

Введение. Персонализированная медицина — направление, позволяющее на индивидуальном уровне прогнозировать возникновение и характер течения заболевания. Идентификация вариантов генотипа определенного гена является условием выявления предрасположенности к мультифакториальным заболеваниям. Показатель степени генотоксического стресса, лежащего в основе многих заболеваний, — количество 8-оксогуанина в сыворотке крови.Цель исследования — изучить ассоциацию полиморфного варианта rs652438 гена mmp12, а также характер окислительного повреждения генома при бронхиальной астме.Методы. Генотипирование полиморфного варианта rs652438 гена mmp12 осуществляли методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени с помощью TaqMan-зондов. Характер взаимосвязи полиморфного варианта гена c заболеванием оценивали по отношению шансов. Степень окислительных повреждений ДНК оценивали по уровню концентрации 8-оксогуанина в сыворотке крови, определяемого методом иммуноферментного анализа с моноклональными антителами. Для статистической обработки результатов исследования использовался пакет программ StatPro с надстройками StatTools (Palisade Corporation, США).Результаты. Благодаря проведенным исследованиям установлены частоты генотипов и аллелей полиморфного локуса rs652438 гена mmp12 в контрольной группе и при бронхиальной астме. Показано наличие достоверных различий для гетерозигот. В контрольной группе этот показатель в 2,3 раза больше, чем при бронхиальной астме (БА) (р < 0,05). Частоты генотипов AA и GG достоверно не отличаются. Значение показателя отношения шансов минорного аллеля G (ОR = 0,362, CI 95 % 0,134–0,975) свидетельствует о протекторном характере его влияния. Это может быть связано со снижением активности кодируемого фермента — металлоэластазы макрофагов, в результате чего снижается степень деструкции внеклеточного матрикса бронхиального дерева. Исходный уровень 8-oxoG в контрольных образцах и при БА составляет 6,4 и 9,4 нг/мл соответственно (U = 25; Uкрит = 23; р > 0,05). Воздействие in vitro электромагнитного поля различной частоты приводит к значительному окислительному повреждению генома в обеих группах и более раннему по отношению к контролю истощению репарационных механизмов при бронхиальной астме.Заключение. Показан протекторный характер минорного аллеля G в отношении изучаемой патологии. При бронхиальной астме изменения адаптационных механизмов к окислительному повреждению генома проявляются снижением устойчивости их к воздействию in vitro электромагнитного поля высокой интенсивности.

Background. Personalised medicine is an avenue to create technologies for individual prognosis of the disease onset and development. The identification of individual gene haplotypes is prerequisite to detecting predispositions to multifactorial diseases. The level of serum 8-oxoguanine is an indicator of genotoxic stress underlying many pathologies.Objectives. A study of associations of mmp12 gene’s polymorphic variant rs652438 and the nature of genome oxidative damage in bronchial asthma.Methods. Genotyping of polymorphic variant rs652438 of gene mmp12 was performed using TaqMan-probe real-time PCR assays. The gene variant association with disease was assessed by odds ratio. The degree of DNA oxidative damage was estimated by 8-oxoguanine serum concentrations determined in monoclonal antibody-based enzyme immunoassays. The StatPro software package with StatTools (Palisade Corporation, USA) was used for statistical data processing.Results. The haplotype and allele frequencies were established for polymorphic locus rs652438 of the mmp12 gene in the control and bronchial asthma cohorts. Heterozygotes were shown to differ significantly; the estimate was 2.3-fold higher in the control vs. bronchial asthma (BA) cohort (p < 0.05). The AA and GG haplotype frequencies did not differ significantly. The minor allele G odds ratio (OR = 0.362, CI 95% 0.134–0.975) suggests its protective effect. This may be associated with a lowering activity of the encoded macrophage metalloelastase enzyme, which results in a poorer extracellular matrix destruction in the bronchial tree. The baseline 8-oxoG levels in the control and BA samples were 6.4 and 9.4 ng/mL, respectively (U = 25, Ucut-off = 23; p >0.05). An in vitro electromagnetic exposure of varying frequency leads to a significant oxidative genomic damage in both cohorts and an earlier reparative depletion in bronchial asthma vs. control.Conclusion. A protective effect of minor allele G against pathology has been demonstrated. Adaptations to oxidative genomic stress in bronchial asthma manifest by an impaired resistance to in vitro high-intensity electromagnetic exposures.

бронхиальная астмагены матриксных металлопротеиназокислительное повреждение ДНК8-оксогуанинbronchial asthmamatrix metalloproteinase genesoxidative DNA damage8-oxoguanineИсследование проведено при финансовой поддержке Кубанского научного фонда в рамках выполнения проекта № МФИ 20.1/119.The study was financially supported by the Kuban Science Foundation as part of project IFI 20.1/119.ReferencesApte S.S., Parks W.C. Metalloproteinases: A parade of functions in matrix biology and an outlook for the future. Matrix. Biol. 2015; 44–46: 1–6. DOI: 10.1016/j.matbio.2015.04.005Apte S.S., Parks W.C. Metalloproteinases: A parade of functions in matrix biology and an outlook for the future. Matrix. Biol. 2015; 44–46: 1–6. DOI: 10.1016/j.matbio.2015.04.005Chen C.G., Iozzo R.V. Extracellular matrix guidance of autophagy: a mechanism regulating cancer growth. Open. Biol. 2022; 12(1): 210304. DOI: 10.1098/rsob.210304Chen C.G., Iozzo R.V. Extracellular matrix guidance of autophagy: a mechanism regulating cancer growth. Open. Biol. 2022; 12(1): 210304. DOI: 10.1098/rsob.210304Xie Y., Wang Z., Chang L., Chen G. Association of MMP-9 polymorphisms with diabetic nephropathy risk: A protocol for systematic review and meta-analysis. Medicine (Baltimore). 2020; 99(38): e22278. DOI: 10.1097/MD.0000000000022278Xie Y., Wang Z., Chang L., Chen G. Association of MMP-9 polymorphisms with diabetic nephropathy risk: A protocol for systematic review and meta-analysis. Medicine (Baltimore). 2020; 99(38): e22278. DOI: 10.1097/MD.0000000000022278Chelluboina B., Nalamolu K.R., Klopfenstein J.D., Pinson D.M., Wang D.Z., Vemuganti R., Veeravalli K.K. MMP-12, a Promising Therapeutic Target for Neurological Diseases. Mol. Neurobiol. 2018; 55(2): 1405– 1409. DOI: 10.1007/s12035-017-0418-5Chelluboina B., Nalamolu K.R., Klopfenstein J.D., Pinson D.M., Wang D.Z., Vemuganti R., Veeravalli K.K. MMP-12, a Promising Therapeutic Target for Neurological Diseases. Mol. Neurobiol. 2018; 55(2): 1405– 1409. DOI: 10.1007/s12035-017-0418-5Москаленко М.И., Полоников А.В., Сорокина И.Н., Якунченко Т.И., Крикун Е.Н., Пономаренко И.В. Генно-средовые взаимодействия полиморфных локусов ММР и ожирения при формировании артериальной гипертонии у женщин. Проблемы Эндокринологии. 2019; 65(6): 425–435. DOI: 10.14341/probl10236Moskalenko M.I., Polonikov A.V., Sorokina I.N., Yakunchenko T.I., Krikun Y.N., Ponomarenko I.V. Gene-environment interactions between polymorphic loci of MMPs and obesity in essential hypertension in women. Problems of Endocrinology. 2019;65(6):425- 435. DOI: 10.14341/probl102366.Chang J.J., Stanfill A., Pourmotabbed T. The Role of Matrix Metalloproteinase Polymorphisms in Ischemic Stroke. Int. J. Mol. Sci. 2016; 17(8): 1323. DOI: 10.3390/ijms17081323Chang J.J., Stanfill A., Pourmotabbed T. The Role of Matrix Metalloproteinase Polymorphisms in Ischemic Stroke. Int. J. Mol. Sci. 2016; 17(8): 1323. DOI: 10.3390/ijms17081323Chen S.S., Song J., Tu X.Y., Zhao J.H., Ye X.Q. The association between MMP-12 82 A/G polymorphism and susceptibility to various malignant tumors: a meta-analysis. Int. J. Clin. Exp. Med. 2015; 8(7): 10845–10854.Chen S.S., Song J., Tu X.Y., Zhao J.H., Ye X.Q. The association between MMP-12 82 A/G polymorphism and susceptibility to various malignant tumors: a meta-analysis. Int. J. Clin. Exp. Med. 2015; 8(7): 10845–10854.Beres B., Yusenko M., Peterfi L., Kovacs G., Banyai D. Matrix metalloproteinase 12 is an independent prognostic factor predicting postoperative relapse of conventional renal cell carcinoma — a short report. Cell. Oncol. (Dordr). 2022; 45(1): 193–198. DOI: 10.1007/s13402-021-00650-9Beres B., Yusenko M., Peterfi L., Kovacs G., Banyai D. Matrix metalloproteinase 12 is an independent prognostic factor predicting postoperative relapse of conventional renal cell carcinoma — a short report. Cell. Oncol. (Dordr). 2022; 45(1): 193–198. DOI: 10.1007/s13402-021-00650-9Tacheva T., Dimov D., Anastasov A., Zhelyazkova Y., Kurzawski M., Gulubova M., Drozdzik M., Vlaykova T. Association of the MMP7 -181A>G Promoter Polymorphism with Early Onset of Chronic Obstructive Pulmonary Disease. Balkan. J. Med. Genet. 2017; 20(2): 59–66. DOI: 10.1515/bjmg-2017-0023Tacheva T., Dimov D., Anastasov A., Zhelyazkova Y., Kurzawski M., Gulubova M., Drozdzik M., Vlaykova T. Association of the MMP7 -181A>G Promoter Polymorphism with Early Onset of Chronic Obstructive Pulmonary Disease. Balkan. J. Med. Genet. 2017; 20(2): 59– 66. DOI: 10.1515/bjmg-2017-0023Buendía-Roldán I., Fernandez R., Mejía M., Juarez F., Ramirez-Martinez G., Montes E., Pruneda A.K.S., Martinez-Espinosa K., Alarcon-Dionet A., Herrera I., Becerril C., Chavez-Galan L., Preciado M., Pardo A., Selman M. Risk factors associated with the development of interstitial lung abnormalities. Eur. Respir. J. 2021; 58(2): 2003005. DOI: 10.1183/13993003.03005-2020Buendía-Roldán I., Fernandez R., Mejía M., Juarez F., Ramirez-Martinez G., Montes E., Pruneda A.K.S., Martinez-Espinosa K., Alarcon-Dionet A., Herrera I., Becerril C., Chavez-Galan L., Preciado M., Pardo A., Selman M. Risk factors associated with the development of interstitial lung abnormalities. Eur. Respir. J. 2021; 58(2): 2003005. DOI: 10.1183/13993003.03005-2020Gharib S.A., Manicone A.M., Parks W.C. Matrix metalloproteinases in emphysema. Matrix.Biol. 2018; 73: 34–51. DOI: 10.1016/j.matbio.2018.01.018Gharib S.A., Manicone A.M., Parks W.C. Matrix metalloproteinases in emphysema. Matrix.Biol. 2018; 73: 34–51. DOI: 10.1016/j.matbio.2018.01.018Abd-Elaziz K., Jesenak M., Vasakova M., Diamant Z. Revisiting matrix metalloproteinase 12: its role in pathophysiology of asthma and related pulmonary diseases. Curr.Opin.Pulm. Med. 2021; 27(1): 54–60. DOI: 10.1097/MCP.0000000000000743Abd-Elaziz K., Jesenak M., Vasakova M., Diamant Z. Revisiting matrix metalloproteinase 12: its role in pathophysiology of asthma and related pulmonary diseases. Curr.Opin.Pulm. Med. 2021; 27(1): 54–60. DOI: 10.1097/MCP.0000000000000743Marcos-Jubilar M., Orbe J., Roncal C., Machado F.J.D., Rodriguez J.A., Fernández-Montero A., Colina I., Rodil R., Pastrana J.C., Páramo J.A. Association of SDF1 and MMP12 with Atherosclerosis and Inflammation: Clinical and Experimental Study. Life (Basel). 2021; 11(5): 414. DOI: 10.3390/life11050414Marcos-Jubilar M., Orbe J., Roncal C., Machado F.J.D., Rodriguez J.A., Fernández-Montero A., Colina I., Rodil R., Pastrana J.C., Páramo J.A. Association of SDF1 and MMP12 with Atherosclerosis and Inflammation: Clinical and Experimental Study. Life (Basel). 2021; 11(5): 414. DOI: 10.3390/life11050414Noël A., Perveen Z., Xiao R., Hammond H., Le Donne V., Legendre K., Gartia M.R., Sahu S., Paulsen D.B., Penn A.L. Mmp12 Is Upregulated by in utero Second-Hand Smoke Exposures and Is a Key Factor Contributing to Aggravated Lung Responses in Adult Emphysema, Asthma, and Lung Cancer Mouse Models. Front. Physiol. 2021; 12: 704401. DOI: 10.3389/fphys.2021.704401Noël A., Perveen Z., Xiao R., Hammond H., Le Donne V., Legendre K., Gartia M.R., Sahu S., Paulsen D.B., Penn A.L. Mmp12 Is Upregulated by in utero Second-Hand Smoke Exposures and Is a Key Factor Contributing to Aggravated Lung Responses in Adult Emphysema, Asthma, and Lung Cancer Mouse Models. Front. Physiol. 2021; 12: 704401. DOI: 10.3389/fphys.2021.704401Du L., Chen F., Xu C., Tan W., Shi J., Tang L., Xiao L., Xie C., Zeng Z., Liang Y., Guo Y. Increased MMP12 mRNA expression in induced sputum was correlated with airway eosinophilic inflammation in asthma patients: Evidence from bioinformatic analysis and experiment verification. Gene. 2021; 804: 145896. DOI: 10.1016/j.gene.2021.145896Du L., Chen F., Xu C., Tan W., Shi J., Tang L., Xiao L., Xie C., Zeng Z., Liang Y., Guo Y. Increased MMP12 mRNA expression in induced sputum was correlated with airway eosinophilic inflammation in asthma patients: Evidence from bioinformatic analysis and experiment verification. Gene. 2021; 804: 145896. DOI: 10.1016/j.gene.2021.145896Шадрина А.С., Плиева Я.З., Кушлинский Д.Н., Морозов А.А., Филипенко М.Л., Чанг В.Л., Кушлинский Н.Е. Классификация, регуляция активности, генетический полиморфизм матриксных металлопротеиназ в норме и при патологии. Альманах клинической медицины. 2017; 45(4): 266–279. DOI: 10.18786/2072-0505-2017-45-4-266-279Shadrina A.S., Plieva Y.Z., Kushlinskiy D.N., Morozov A.A., Filipenko M.L., Chang V.L., Kushlinskii N.E. Classification, regulation of activity, and genetic polymorphism of matrix metalloproteinases in health and disease. Almanac of Clinical Medicine. 2017; 45(4): 266–279 (In Russ., English abstract). DOI: 10.18786/2072-0505-2017-45-4-266-279Strelkova M.I., Senatorova G.S., Polyakov V.V. The role of polymorphisms of matrix metalloproteinases’ polymorphisms 1 and 12 in the formation of wheezing syndrome among children with recurrent bronchitis. Wiadomosci Lekarskie. 2021; 74(7): 1595–1599. DOI: 10.36740/wlek202107108Strelkova M.I., Senatorova G.S., Polyakov V.V. The role of polymorphisms of matrix metalloproteinases’ polymorphisms 1 and 12 in the formation of wheezing syndrome among children with recurrent bronchitis. Wiadomosci Lekarskie . 2021; 74(7): 1595–1599. DOI: 10.36740/wlek202107108Москаленко М.И., Пономаренко И.В., Полоников А.В., Чурносов М.И. Полиморфный локус rs652438 гена MMP12 ассоциирован с развитием артериальной гипертензии у женщин. Артериальная гипертензия. 2019; 25(1): 60–65. DOI: 10.18705/1607-419X-2019-25-1-60-65Moskalenko M.I., Ponomarenko I.V., Polonikov A.V., Churnosov M.I. Polymorphic locus rs652438 of the MMP12 gene is associated with the development of hypertension in women. Arterial Hypertension. 2019; 25(1): 60–65 (In Russ., English abstract). DOI: 10.18705/1607-419X-2019-25-1-60-65Попов А.В., Юдкина А.В., Воробьев Ю.Н., Жарков Д.О. Каталитически компетентные конформации активного центра 8-оксогуанин-ДНК-гликозилазы человека. Биохимия. 2020; 85(2): 225–238. DOI: 10.31857/S0320972520020062Popov A.V., Yudkina A.V., Vorobjev Y.N., Zharkov D.O. Catalytically Competent Conformation of the Active Site of Human 8-Oxoguanine-DNA Glycosylase. Biochemistry (Mosc). 2020; 85(2): 192–204. DOI: 10.1134/S0006297920020066Жарков Д.О. ДНК-гликозилазы — основные элементы системы репарации ДНК. Вестник Российской академии наук. 2013; 83(2): 112–119. DOI: 10.7868/S0869587313010180Zharkov D.O. DNA glycosylases: the main elements of the dna repair system. Vestnik Rossiyskoy akademii nauk. 2013; 83(2): 112–119 (In Russ., English abstract). DOI: 10.7868/S0869587313010180Павлюченко И.И., Гусарук Л.Р., Текуцкая Е.Е., Рубцова И.Т. Распространенность и молекулярно-генетические особенности буллезного эпидермолиза в популяции жителей Краснодарского края. Кубанский научный медицинский вестник. 2020; 27(5): 88–99. DOI: 10.25207/1608-6228-2020-27-5-88-99Pavlyuchenko I.I., Gusaruk L.R., Tekutskaya E.E., Rubtsova I.T. Prevalence and molecular genetic features of epidermolysisbullosa in Krasnodar Krai. Kuban Scientific Medical Bulletin. 2020; 27(5): 88– 99 (In Russ., English abstract).DOI: 10.25207/1608-6228-2020-27-5-88-99Текуцкая Е.Е., Гусарук Л.Р., Ильченко Г.П. Влияние переменного магнитного поля на хемилюминесценцию лимфоцитов периферической крови человека и производство ими провоспалительных цитокинов. Биофизика. 2022; 67(1): 113–120. DOI: 10.31857/s0006302922010112Tekutskaya E.E., Gusaruk L.R., Il’chenko G.P. Effect of an alternating magnetic field on the chemiluminescence of human peripheral blood mononuclear cells and the production of pro-inflammatory cytokines. Biofizika. 2022; 67(1): 113–120 (In Russ., English abstract). DOI: 10.31857/s0006302922010112Tacheva T., Dimov D., Aleksandrova E., Bialecka M., Gulubova M., Vlaykova T. The G allele of MMP12 -82 A > G promoter polymorphism as a protective factor for COPD in Bulgarian population. Arch. Physiol. Biochem. 2017; 123(5): 371–376. DOI: 10.1080/13813455.2017.1347690Tacheva T., Dimov D., Aleksandrova E., Bialecka M., Gulubova M., Vlaykova T. The G allele of MMP12 -82 A > G promoter polymorphism as a protective factor for COPD in Bulgarian population. Arch. Physiol. Biochem. 2017; 123(5): 371–376. DOI: 10.1080/13813455.2017.1347690Tacheva T., Dimov D., Aleksandrova E., Bialecka M., Gulubova M., Vlaykova T. MMP12 -82 A>G Promoter Polymorphism in Bronchial Asthma in a Population of Central Bulgaria. Lab. Med. 2018; 49(3): 211–218. DOI: 10.1093/labmed/lmx085. PMID: 29390099Tacheva T., Dimov D., Aleksandrova E., Bialecka M., Gulubova M., Vlaykova T. MMP12 -82 A>G Promoter Polymorphism in Bronchial Asthma in a Population of Central Bulgaria. Lab. Med. 2018; 49(3): 211–218. DOI: 10.1093/labmed/lmx085. PMID: 29390099Gilowska I., Majorczyk E., Kasper Ł., Bogacz K., Szczegielniak J., Kasper M., Kaczmarski J., Skomudek A., Czerwinski M., Sładek K. The role of MMP-12 gene polymorphism - 82 A-to-G (rs2276109) in immunopathology of COPD in polish patients: a case control study. BMC Med. Genet. 2019; 20(1): 19. DOI: 10.1186/s12881-019-0751-9Gilowska I., Majorczyk E., Kasper Ł., Bogacz K., Szczegielniak J., Kasper M., Kaczmarski J., Skomudek A., Czerwinski M., Sładek K. The role of MMP-12 gene polymorphism - 82-A-to-G (rs2276109) in immunopathology of COPD in polish patients: a case control study. BMC Med. Genet. 2019; 20(1): 19. DOI: 10.1186/s12881-019-0751-9

The authors declare that there are no conflicts of interest present.