Иммуногистохимический профиль мононуклеарного инфильтрата в миокарде пересаженного сердца. Компьютерная морфометрия

Цель. Количественная иммунофенотипическая характеристика клеточных коопераций в мононуклеарном воспалительном инфильтрате миокарда при клеточной и гуморальной формах отторжения пересаженного сердца с применением компьютерной морфо- метрии для анализа эндомиокардиальных биоптатов.

Материалы и методы. Эндомиокардиальные биоптаты (n = 226) получены от 56 реципиентов сердца, перенесших трансплантацию в 2018–2019 гг. Срезы толщиной 5 мкм после проводки в парафин окрашивали по стандартной методике гематоксилином и эозином. Иммуногистохимическим стрептавидин-биотиновым методом определяли экспрессию маркеров Т-лимфоцитов CD3, В-лимфоцитов CD20 и макрофагов CD68. С помощью компьютерной морфометрии вычисляли коэффициент площади окрашивания (КПО) — процентное отношение суммарной площади окрашенных объектов к площади биоптата. Статистическая обработка результатов включала в себя проверку характера распределения методом Колмогорова — Смирнова, а также расчет критерия Крамера — Уэлча.

Результаты. Присутствие лимфоцитов и макрофагов обнаружено в воспалительном инфильтрате всех сердечных трансплантатов. Экспрессия маркера CD3 Т-лимфоцитов при отсутствии отторжения (0R) составила КПО = 0,99 ± 0,02%, при степени отторжения 1R показатель возрастал в 2,1 раза (р < 0,05), при 2R — в 3,4 раза (р < 0,05), при 3R — в 5,5 раза (р < 0,05), при гуморальном отторжении — в 4,8 раза (р < 0,05) по сравнению с 0R. Экспрессия маркера В-лимфоцитов CD20 при отсутствии отторжения характеризуется КПО = 0,19 ± 0,01%, степень 1R — возрастанием показателя в 2,7 раза (р < 0,05), степень 2R — в 3,4 раза (р < 0,05), 3R — в 4,4 раза (р < 0,05), а при гуморальном отторжении — в 9,5 раза выше, чем при 0R (р < 0,05). Величина CD68-позитивной области макрофагов при 0R была всего 0,34 ± 0,01%, возрастала при степени 1R в 2,7 раза (р < 0,05), в 4,0 раза при 2R (р < 0,05), в 9,6 раза при 3R (р < 0,05), а при гуморальном отторжении — в 4,1 раза (р < 0,05).

Заключение. Клеточные кооперации в мононуклеарном воспалительном инфильтрате сердечного трансплантата характеризуются преобладанием Т-лимфоцитов как при клеточном, так и при гуморальном отторжении. Экспрессия В-лимфоцитарного маркера наиболее выражена при антитело-опосредованной форме. Максимальное присутствие макрофагов в инфильтрате характеризует тяжелое клеточное отторжение. По мере возрастания тяжести клеточного отторжения относительное содержание в инфильтрате В-лимфоцитов и макрофагов увеличивается.

1. D’Addio F., Margonato D., Pensato U., Borgese L., Potena L., Fiorina P. Novel therapeutic and diagnostic management of heart transplant patients. Heart Lung Vessel. 2015; 7(3): 198–207.

2. Tsamandas A.C., Pham S.M., Seaberg E.C., Pappo O., Kormos R.L., Kawai A., et al. Adult Heart Transplantation Under Tacrolimus (FK506) Immunosuppression: Histopathologic Observations and Comparison to a Cyclosporine-based Regimen with Lympholytic (ATG) Induction. J. Heart Lung Transplant. 2017: 16(7): 723–734.

3. Веревкин А.А., Славинский А.А., Космачева Е.Д. Морфофункциональная характеристика отторжения трансплантированного сердца. Клиническая и экспериментальная морфология. 2018; 2(26): 55–61. DOI: 10.31088/2226-5988-2018-26-2-55-60

4. Berry G.J., Burke M.M., Andersen C., Bruneval P., Fedrigo M., Fishbein M.C., et al. The 2013 International Society for Heart and Lung Transplantation Working Formulation for standardization of nomenclature in the pathologic diagnosis of antibody — mediated rejection in heart transplantation. J. Heart Lung Transplant. 2013; 32(12): 1147–1162. DOI: 10.1016/j.healun.2013.08.011

5. Веревкин А.А., Славинский А.А., Космачева Е.Д., Ставенчук Т.В. Патоморфологические признаки повреждения миокарда при отторжении трансплантированного сердца. Кубанский научный медицинский вестник. 2017; 24(6): 17–21. DOI: 10.25207/1608-6228-2017-24-6-17-21

6. Berry G.J., Angelini A., Burke M.M., Bruneval P., Fishbein M.C., Hammond E., et al. The ISHLT working formulation for pathologic diagnosis of cellular and antibody-mediated rejection in heart transplantation: evolution and current status (2005–2011). J. Heart Lung Transplant. 2011; 30(6): 601–611. DOI: 10.1016/j.healun.2011.02.015

7. Schneider C.A., Rasband W.S., Eliceiri K.W. NIH Image to ImageJ: 25 years of image analysis. Nat. Methods. 2012; 9(7): 671–675. DOI: 10.1038/nmeth.2089

8. Boer K., Caliskan K., Peeters A.M., van Groningen M.C., Samsom J.N., Maat A.P., et al. Thymus-Derived Regulatory T Cells Infiltrate the Cardiac Allograft Before Rejection. Transplantation. 2015; 99(9): 1839–1846. DOI: 10.1097/TP.0000000000000730

9. Carrell J., Groves C.J. OMIP-043: Identification of human antibody secreting cell subsets. Cytometry. 2018; 93(2): 190–193. DOI: 10.1002/cyto.a.23305

10. Bao Y., Cao X. The immune potential and immunopathology of cytokine-producing B cell subsets: A comprehensive review. J. Autoimmun. 2014; 55: 10–23. DOI: 10.1016/j.jaut.2014.04.001

11. Gordon S., Martinez F.O. Alternative activation of macrophages: mechanism and functions. Immunity. 2010; 32(5): 593–604. DOI: 10.1016/j.immuni.2010.05.007